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冷凍干燥機(jī)在病毒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中的應(yīng)用
發(fā)布日期：2022/12/28 10:31:14

病毒是一種個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡單，只含一種核酸DNA或RNA，必須在活細(xì)胞內(nèi)寄生并以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型生物。病毒是一種非細(xì)胞生命形態(tài)，它由一個(gè)核酸長鏈和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成，病毒沒有自己的代謝機(jī)構(gòu)，沒有酶系統(tǒng)。

真空凍干病毒

冷凍干燥全稱真空冷凍干燥，簡稱凍干，是在低溫減壓條件下，利用水的升華使制品低溫脫水而達(dá)到干燥的一種技術(shù)。凍干在低溫低氧條件下進(jìn)行，多數(shù)生物反應(yīng)停滯，且處理過程無液態(tài)水存在，使物料原有結(jié)構(gòu)和形狀得到大程度的保護(hù)。

真空凍干病毒比較穩(wěn)定，可于室溫短期保存， 4~8℃長期保存。此法綜合利用了各種有利于毒種保存的因素，具有成活率高，變異性小等優(yōu)點(diǎn)，是常用的較理想的毒種保存方法之一。病毒疫苗凍干主要關(guān)注的是凍干后病毒滴度、殘余水分、熱穩(wěn)定性、抗原性及相關(guān)免疫實(shí)驗(yàn)。

凍干病毒會(huì)使用保護(hù)劑，保護(hù)劑一般采用脫脂牛奶或血清、人血白蛋白等，作用機(jī)理是在冷凍干燥的脫水過程中穩(wěn)定病毒結(jié)構(gòu)，防止細(xì)胞膜受冷凍或干燥而造成損傷。


實(shí)驗(yàn)過程

第一步

將滅活后的病毒液制備藍(lán)耳病病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，將純化后的病毒進(jìn)行無菌檢測、外源性病毒檢測。

第二步

將凍干保護(hù)劑與藍(lán)耳病病毒液混合搖勻后，移液分裝至10支容量為3 mL的具十字橡膠塞的無菌瓶中（十字塞的十字部分插入瓶中，塞冒懸于瓶口），每支1 mL試樣。

第三步

將10支分裝好的試樣瓶置于-80 ℃的預(yù)凍30 min后取出，預(yù)凍后樣品瓶置于冷阱溫度已達(dá)-45 ℃的凍干倉中，運(yùn)行真空泵開始凍干，一直到樣品質(zhì)量不發(fā)生變化時(shí)凍干結(jié)束并在真空狀態(tài)下壓蓋密封十字橡膠塞，得到凍干后的樣品。

第四步

采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測藍(lán)耳病病毒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的均勻性、穩(wěn)定性，得到藍(lán)耳病病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)也為該病毒定性和定量檢測提供標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

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